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什么時候需要穩(wěn)定細(xì)胞株?

更新時間:2020-03-19      點擊次數(shù):1840
   什么時候需要穩(wěn)定細(xì)胞株?
  以下實驗,構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株而不是瞬時轉(zhuǎn)染更能滿足實驗要求:
  1)外源片段在分裂細(xì)胞中長期(>2周)穩(wěn)定表達(dá)。雖然普通轉(zhuǎn)染實驗一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達(dá)效率,但腺病毒載體在多數(shù)分裂細(xì)胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)周期。而非分裂細(xì)胞,可以使用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因,因為腺相關(guān)病毒載體在許多非分裂細(xì)胞中可以保持長達(dá)1年的高效表達(dá)。
  2)需要構(gòu)建使用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),這主要是由于:
  a)過表達(dá)基因或者干擾目的基因引起細(xì)胞毒性或者抑制細(xì)胞生長等不利因素;
  b)目的基因的過表達(dá)或者干擾需要時空特異性。
  3)希望控制目的基因過表達(dá)或者干擾的拷貝數(shù),以避免引入人為因素影響實驗結(jié)果的精確性。構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進行實驗研究。
  4)部分細(xì)胞種類,病毒載體亦無法達(dá)到高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,通過構(gòu)建穩(wěn)定株,達(dá)到外源片段的高效表達(dá)。
  5)長期在少數(shù)幾類細(xì)胞中研究幾個基因的功能,通過構(gòu)建穩(wěn)定株,可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本,也極大方便實驗研究。
  6)部分蛋白穩(wěn)定性*,瞬時RNA干擾因為作用周期短,只能抑制目的基因的表達(dá),但無法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白,所以需要通過構(gòu)建穩(wěn)定株實現(xiàn)更好的基因干擾效果。
  7)需要往動物體內(nèi)注射表達(dá)有外源片段的細(xì)胞。需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株,以防止注射入動物體內(nèi)后,很快外源片段表達(dá)丟失。
  8)細(xì)胞個體差異(同一類細(xì)胞,不同個體細(xì)胞基因組存在差異)對實驗結(jié)果有干擾,需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株去除干擾。
  9)需要將外源片段插入基因組中,比如基因敲除,基因插入突變篩選等修飾基因組的實驗。
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