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如何拯救被污染的細(xì)胞

更新時間:2016-06-15      點(diǎn)擊次數(shù):3934

 夏天到了,細(xì)胞更容易被污染,很多養(yǎng)細(xì)胞的朋友在這方面困惑頗多,今天針對貼壁生長的細(xì)胞談?wù)劇?在討論之前,大家首先要有一個概念,即潔凈區(qū),并不是沒有細(xì)菌,而是細(xì)菌的數(shù)量非常少,在我們的潔凈操作臺里,并不是真正一個細(xì)菌都沒有的,所以在操作的時候還是要盡量利索迅速地完成操作。盡量減少進(jìn)入培養(yǎng)體系細(xì)菌的數(shù)量。 所以處理細(xì)菌污染的重要原則就是:無限地稀釋細(xì)菌的濃度,無限地減少細(xì)菌的數(shù)量!

對于細(xì)菌污染(常見為金黃色葡萄球菌和大腸桿菌);

污染處理流程

1、將污染的培養(yǎng)液倒掉,轉(zhuǎn)燒瓶口,加入10 mlPBS,適當(dāng)晃動清洗培養(yǎng)瓶,然后倒掉。轉(zhuǎn)燒瓶口。

2、繼續(xù)加入10mlPBS,同樣方法晃動,清洗培養(yǎng)瓶,然后倒掉。

3、繼續(xù)加入5mlPBS,同樣方法洗瓶,主要是培養(yǎng)面,然后倒掉。

4、重復(fù)步驟3再洗。

5、重復(fù)步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。

7、加入3ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

9、加入10ml培養(yǎng)液,加入2ml雙抗,放置培養(yǎng)箱培養(yǎng),5小時之后,倒掉培養(yǎng)基,加入PBS洗瓶兩次,然后加入胰酶消化,吹打后置于離心機(jī)800-1000r/min離心,然后洗一次。置于新的培養(yǎng)瓶里培養(yǎng),培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。

10、24h之后,視情況換液,若仍然污染嚴(yán)重,培養(yǎng)基渾濁,重復(fù)以上步驟,若看不到污染物,則繼續(xù)步驟1)、3)、4)、6)、8),然后加入培養(yǎng)液培養(yǎng),培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。

11、24h之后,若仍污染嚴(yán)重,可再重復(fù)一次,若還污染只能棄之(不過一般沒有出現(xiàn)這種情況),若鏡下不見污染物,則換液PBS洗瓶,正常培養(yǎng)。

 

若為霉菌或者真菌污染:

     加入兩性霉素B清洗和培養(yǎng),終濃度一般為2.5μg/ml(在30μg/ml時會有細(xì)胞毒性)。另外也可以選擇在培養(yǎng)基里加3ug/ml的制霉菌素或放線菌素D。 其它操作同;

 

若為支原體污染有幾種支原體清除劑,

     1.BM-Cyclin(就是泰妙菌素+米諾環(huán)素)2.環(huán)丙沙星,這也是一種支原體較為敏感的抗生素,3.MRA,這個是商業(yè)化的支原體去除劑(Mycoplasma Removal Agent)是喹諾酮族抗生素的衍生物,使用后發(fā)覺,采用泰妙菌素和米諾環(huán)素的效果更好些,支原體耐藥率低,同時對細(xì)胞的抑制也較低。;

 

除此還是需要你在無菌觀念和無菌操作上下大功夫加強(qiáng)了,預(yù)防為主,還是要強(qiáng)調(diào)無菌操作,尤其注意血清的質(zhì)量,這個是主要來源。

 

在操作的過程中,一定要小心操作動作,輕柔緩慢,切忌大動作魯莽。防止細(xì)胞脫落。當(dāng)然如果你的細(xì)胞仍有富余或者凍存的,我還是建議你把污染的扔掉,再復(fù)蘇方便省事。這個拯救細(xì)胞還是主要針對你就只剩這一瓶細(xì)胞無路可退的時候。

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